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维(wei)生(sheng)素即用(yong)型产品(pin)——解(jie)决您(nin)的“难(nan)”点

发(fa)布时间: 2021-05-13

相信开展过维生素检(jian)测(ce)的小伙伴(ban)们,已经体验(yan)到了(le)微(wei)(wei)生物法(fa)检(jian)测(ce)维生素的“难(nan)”了(le)。试(shi)验(yan)中总是出(chu)现(xian)诸多问题——活化菌株(zhu)不成功(gong),标(biao)(biao)准曲线(xian)异常,检(jian)测(ce)结果回收率偏高或者偏低,重复(fu)性差(cha)等。为(wei)何此种(zhong)方法(fa)如此难(nan)做(zuo),国标(biao)(biao)还将(jiang)叶酸、B12、生物素、泛酸的微(wei)(wei)生物检(jian)测(ce)方法(fa)作为(wei)首选方法(fa)和仲(zhong)裁方法(fa)呢(ni)?


微(wei)生(sheng)物法根据(ju)菌株必须依赖特(te)定维生(sheng)素(su)才能生(sheng)长的原理,利用(yong)比浊法测(ce)定细菌繁(fan)殖(zhi)程度(du)或代谢产物,间接对该维生(sheng)素(su)进(jin)行(xing)定量测(ce)定。该方(fang)法特(te)异性强,灵敏度(du)高,也是(shi)国际(ji)上广泛使用(yong)的方(fang)法。微(wei)生(sheng)物法检测(ce)的是(shi)具有(you)生(sheng)物活性可以被吸收利用(yong)的维生(sheng)素(su)总量,这是(shi)仪器(qi)分析方(fang)法很难(nan)做到的。


“难”在哪里呢?是否有解决办法呢?



“难”点一:菌株活化、保存、定期转种以及接种液制备



鼠李糖乳(ru)杆(gan)菌(jun)ATCC7469、植物(wu)乳(ru)杆(gan)菌(jun)ATCC8014、莱(lai)士(shi)曼(man)氏乳(ru)杆(gan)菌(jun)ATCC7830,这三(san)株(zhu)菌(jun)中(zhong)当(dang)属莱(lai)士(shi)曼(man)氏乳(ru)杆(gan)菌(jun)最(zui)为娇贵,常(chang)有活(huo)化失败的案(an)例(li)发(fa)生(sheng)(sheng)。建议大家购买(mai)此菌(jun)后,第一(yi)次活(huo)化时需(xu)严格(ge)按照(zhao)ATCC说明(ming)书(shu)上方(fang)(fang)法先接种于MRS肉汤(tang)中(zhong)35℃,有氧培养(yang)(yang)48h,之后转种血平板于35℃,厌(yan)氧培养(yang)(yang)48h,方(fang)(fang)可(ke)(ke)活(huo)化成(cheng)(cheng)功。此外(wai),每(mei)次做微(wei)生(sheng)(sheng)物(wu)法检测(ce)维生(sheng)(sheng)素试(shi)验(yan)前(qian),需(xu)提(ti)前(qian)用(yong)一(yi)周时间(jian)来活(huo)化储(chu)备菌(jun)种,连续(xu)传(chuan)种2代(dai)~3代(dai)恢复细菌(jun)活(huo)力后,方(fang)(fang)可(ke)(ke)使用(yong)。接种液的制备因项目不(bu)同而处理方(fang)(fang)法不(bu)同,笔(bi)者不(bu)再赘述,只强(qiang)调(diao)一(yi)点(dian):方(fang)(fang)法中(zhong)只给出大致(zhi)菌(jun)液浓度范围即“透光(guang)率60%~80%之间(jian)”,具体调(diao)成(cheng)(cheng)多少浓度,还需(xu)实验(yan)者根据菌(jun)株(zhu)状(zhuang)态和(he)试(shi)验(yan)经验(yan)进行制备。


应对“难”点一的解决方案——使用冻干的定量菌球


此产品真空包装,菌(jun)(jun)浓度定量(liang)制备且符合国标要求,直接加(jia)入培(pei)养基(ji)中即可(ke)使用,既可(ke)保证(zheng)菌(jun)(jun)株活性又可(ke)免去(qu)活菌(jun)(jun)、洗菌(jun)(jun)、调(diao)菌(jun)(jun)浓度等繁琐操(cao)作,方便、简单、准确!同时,我司还提(ti)供了标准菌(jun)(jun)株的来源(yuan)说明(ming),可(ke)存档溯源(yuan)。


维生素即用型产品——解决您的“难”点




“难(nan)”——标准溶液的配制



目前标准中(zhong),要求标准品的纯度(du)需要≥99%。通常购买到的标准品纯度(du)都不够(gou),因此需要折(zhe)算后进行(xing)称量(liang),具体算法为:


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称量后按照国(guo)标要求逐(zhu)步(bu)稀释,依次配(pei)制标准(zhun)储备液、中间液和工作液。配(pei)制时(shi),需要注意(yi)——以下几(ji)点(dian):



1

标准品(pin)(pin)精(jing)确(que)称(cheng)量(liang),应使用(yong)足够精(jing)度的天平进(jin)行(xing)标准品(pin)(pin)的称(cheng)量(liang);


2

不同维生素(su)种类(lei)使用不同的(de)溶解(jie)液,溶解(jie)需充分(fen)摇匀,每次(ci)定容都需十(shi)分(fen)精准;


3

使用(yong)棕色容量瓶进行标准溶液(ye)(ye)(ye)的配制,应注(zhu)意不同(tong)维生(sheng)素种类(lei)的标准储备液(ye)(ye)(ye)、中间液(ye)(ye)(ye)和(he)工作液(ye)(ye)(ye)的保存条件及效期;


4

国标(biao)规定配(pei)制(zhi)使用的(de)水为二级水,所用的(de)试剂比如NaOH、乙醇等为分析(xi)纯或者更高(gao)级别。


标(biao)准(zhun)溶液的配制过程复杂、步骤较多、对操作人员的技术水平要求比较高,配制的准(zhun)确与否会直接影响检(jian)测结果的准(zhun)确性,导(dao)致回收率偏高或(huo)者偏低的情况发生(sheng)。


应对“难”点二的解决方案——使用冻干的定量标准品


我司(si)推出冻(dong)干定量标(biao)准(zhun)(zhun)品,只需(xu)使用无菌(jun)水复溶,充分震荡混匀,即可(ke)使用。一“键”操(cao)作(zuo)即可(ke)免去大家进(jin)行(xing)标(biao)准(zhun)(zhun)品称量、配制、稀释(shi)、保存等(deng)复杂的工作(zuo)。同时我司(si)还提供(gong)了(le)标(biao)准(zhun)(zhun)品来源说明,可(ke)溯源,请放心使用。


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“难”点三——培养基的制备






制(zhi)备维生(sheng)素测定培养(yang)基,三(san)角瓶需专用(yong),不可与(yu)配制(zhi)其他培养(yang)基的(de)三(san)角瓶混用(yong),否则(ze)易混入(ru)目标维生(sheng)素的(de)成分;



培养基配制用水(shui),必须(xu)使用GB/T6682规定的(de)二级(ji)水(shui);

  

维生素(su)测定培养(yang)基中,含有很多不耐热、易(yi)变性成分,高(gao)压灭菌时(shi)(shi)需注意不可过度加(jia)热。此外(wai),灭菌后应及时(shi)(shi)将(jiang)测定系列管从高(gao)压锅中拿(na)出,放入冷水(shui)中快(kuai)速降温;



操作繁琐(suo),耗(hao)时(shi)。需(xu)先将培养基分装(zhuang)系列测试管,灭菌(jun),再接种(zhong)菌(jun)液(ye),此(ci)操作过(guo)程繁琐(suo)易污染,稍有不慎就(jiu)会导致(zhi)试验失败(bai)。



应对“难”点三的解决方案——使用即用型培养基


即用型培养(yang)基,已(yi)灭(mie)(mie)菌处理(li),加入菌球(qiu)混匀后,直(zhi)接分装到系列试验(yan)管中(zhong),只需“一步(bu)(bu)”即可完成接种(zhong)(zhong)操(cao)作,替代国标中(zhong)培养(yang)基灭(mie)(mie)菌和接种(zhong)(zhong)菌液的“两步(bu)(bu)”工作,解决上述(shu)“难”点的同时,大大节约时间,提高(gao)工作效率。



“难”点四——容量瓶,试管,枪头等试验材料洁净度



维生素检(jian)测过程(cheng)所涉及的所有器(qi)皿,包括容量瓶,吸(xi)管,三角瓶,试管,试管塞等均需处理,方可使用。此外,建议每个(ge)项目器(qi)皿专用,不要(yao)混用,避免干扰。


维生素即用型产品——解决您的“难”点


应对“难”点四的解决方案——使用无菌试管


维生素(su)即(ji)用(yong)型产(chan)品,配(pei)套使用(yong)无(wu)菌试(shi)管(guan),避免(mian)试(shi)管(guan),试(shi)管(guan)塞清洗,酸泡,热处(chu)理的麻烦,极大程度的去除维生素(su)检测的干扰因素(su),提高(gao)工作(zuo)效率(lv)的同时,保(bao)证结果的准确性。


维生素即用型产品——解决您的“难”点




小(xiao)结


维(wei)生(sheng)素即用(yong)型(xing)产品——可有效(xiao)解决国标法检(jian)测(ce)试验过程中的所(suo)有“难”点!减(jian)少人员操作误差,提升试验结果的准确性,并可极大程度的提高检(jian)测(ce)效(xiao)率!



维生素即用型产品——解决您的“难”点


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